Меню
Яндекс.Метрика

Диагностика токсоплазмоза

Диагностика острого токсоплазмоза основана на выделении токсоплазм из жидкостей организма или крови (подробности см. ниже в разделе Методы выделения), обнаружении тахизоитов в гистологических срезах (или в мазках-отпечатках) или жидкостях организма, выявлении характерных гистологических изменений в лимфатических узлах, а также на результатах тестов.

Выделение возбудителя. Возбудители могут быть выделены при введении лейкоцитов, жидкостей организма или образцов тканей в тканевую культуру или заражении мышей путем подкожной или внутрибрюшинной инокуляции им исследуемого материала. Жидкости организма должны быть обработаны и введены немедленно, а кровь и ткани могут сохраняться некоторое время (в течение ночи) при температуре. 4°С. Замораживание или обработка образцов формалином губительно действуют на возбудителя. Мышей следует обследовать на наличие паразитов в перитонеальной жидкости через 6 — 10 дней после инокуляции или, в случае их гибели, раньше. Мышей, выживших в течение 6 нед, необходимо обследовать на наличие антител к токсоплазмам в сыворотке. При обнаружении антител и визуальном выявлении цист токсоплазм в головном мозге диагноз подтверждается. Если у мышей, в крови которых присутствуют антитела против токсоплазм, цисты в головном мозге не обнаружены, кусочки их головного мозга, печени и селезенки следует ввести другим мышам.

У большинства больных выделение токсоплазм как из жидкостей организма, так и из крови свидетельствует об острой стадии инфекции. Хотя персистирующая паразитемия и была описана у лиц с латентной инфекцией, это достаточно редкий случай, исключая, возможно, больных с хроническим миелолейкозом. Выделение паразитов из тканей (например, скелетных мышц, легких, головного мозга или глаз), полученных при биопсии или аутопсии, может свидетельствовать о наличии тканевых цист, но не является доказательством острой инвазии.

Гистологическая диагностика. Обнаружение тахизоитов в срезах тканей (например, эндомиокардиальных биоптатах от реципиентов трансплантатов сердца), в мазках (например, из биоптата головного мозга, пунктата костного мозга) или в жидкостях организма (например, спинномозговая, амниотическая жидкость) дает основание для диагностики острой инвазии. Тахизоиты трудно идентифицировать с помощью обычных методов окраски; для этих целей успешно используются прямой и непрямой методы выявления флюоресцирующих антител и метод пероксидазо-антипероксидазной (ПАП) иммуногистохимической окраски. Обнаружение тканевых цист не позволяет отдифференцировать острую инвазию от хронической . Наличие множества цист в каком-либо органе свидетельствует о недавнем заражении. Характерные гистологические признаки имеются при токсоплазмозном лимфадените (см. раздел Патологические изменения).

Серологические тесты. Методами, наиболее широко используемыми для диагностики острого токсоплазмоза, служат реакция с красителем Сейбина—Фельдмана, непрямая реакция флюоресцирующих антител (НРФА), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Перспективным является определение антител с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) или радиоиммунного метода, так как эти методы могут быть автоматизированы.

Те ст с кр асителем, главным образом определяющий антитела класса IgG, можно рассматривать как чувствительный и специфичный. По рекомендациям ВОЗ титры в тесте с красителем следует выражать в международных единицах (МЕ/мл). ВОЗ может также прислать стандартную референс-сыворотку.

Непрямая реакция флюоресцирующих антител пригодна для определения тех же антител, что и те ст с кр асителем, и является наиболее широко используемым методом диагностики. В обеих реакциях титры имеют тенденцию изменяться параллельно. Нейтрализующие антитела IgG в тесте с красителем и антитела в непрямой реакции флюоресценции обычно выявляются через 1 — 2 нед после заражения, достигают высоких титров (1:1000) через 6—8 нед и постепенно снижаются на протяжении нескольких месяцев или лет; низкие титры (например, 1:4 или 1:64) обычно персистируют в течение всей жизни. Величина титра антител не коррелирует с тяжестью заболевания.

Наборы для постановки реакции агглютинации выпускаются с коммерческими целями фирмой Bio-Merieux (Лион, Франция). Эта реакция выявляет антитела класса IgG. В качестве антигена используются цельные паразиты, консервированные в формалине. Так как реакция весьма чувствительна к антителам класса IgM, естественные антитела IgM часто являются причиной неспецифической агглютинации в сыворотке крови лиц с отрицательными результатами в тесте с красителем и непрямой реакции флюоресцирующих антител. Проблему удается устранить использованием в реакции агглютинации 2-меркаптоэтанола. Эту реакцию не следует использовать для определения антител IgM. Она является простым, точным, недорогим и эффективным методом для скрининга сывороток беременных женщин и используется при выявлении антител к токсоплазмам у больных со СПИДом.

Непрямую реакцию флюоресцирующих антител-IgM (IgM-НРФА) используют для диагностики острого токсоплазмоза, так как антитела IgM появляются рано (уже через 5 дней после заражения) и рано исчезают в отличие от антител гамма-О-глобулина (IgG). В большинстве случаев антитела IgM-НРФА быстро повышаются (достигая уровня 1:80— 1:1000) и снижаются до невысоких титров (1:10—1:20) или исчезают в течение нескольких недель или месяцев. Однако у некоторых больных они сохраняются на низком уровне на протяжении нескольких лет. У некоторых иммунодефицитных больных с острым токсоплазмозом и у большей части больных с наличием только активного токсоплазмоза глаз антитела IgM к токсоплазмам могут отсутствовать. Причиной ложноположительной реакции IgM-НРФА может служить ревматоидный фактор, удаление которого (например, путем абсорбции) устраняет ложноположительные результаты в этой реакции. Антинуклеарные антитела могут быть причиной ложноположительных реакций как в НРФА, так и в IgM-НРФА.

Дабл-сэндвич твердофазный иммуноферментный анализ (DS-ELISA IgM) более чувствителен и специфичен, чем IgM-НРФА для выявления антител класса IgM. При этом антинуклеарные антитела и ревматоидный фактор не являются причиной ложноположительных результатов исследования. При интерпретации результатов этой реакции у взрослых больных используются следующие критерии: содержание в сыворотке антител класса IgM против токсоплазм от 6 до 10 указывает на то, что заражение токсоплазмозом, вероятнее всего, произошло недавно (т. е. в пределах предшествующих 5 мес ); уровень от 2 или 3 указывает на то, что инвазия существовала уже несколько месяцев или долее; уровень 4 или 5 можно рассматривать как промежуточный, а уровень 0 или 1 свидетельствует об отсутствии инфекции.

DS-IgM-ELISA более специфичен и чувствителен, чем IgM-НРФА для диагностики врожденного и острого приобретенного токсоплазмоза. DS-IgM-ELISA выявляет приблизительно 75% младенцев с врожденной токсоплазмозной инфекцией, в то время как IgM-НРФА — лишь 25% младенцев с подтвержденным врожденным токсоплазмозом. DS-IgM-ELISA не дает ложноположительных результатов при наличии ревматоидного фактора (который может продуцировать плод) и ложноотрицательных результатов вследствие конкуренции, обусловленной высоким уровнем материнских антител IgM (что отмечается в IgM-НРФА).

IgM-иммуносорбентный метод (IgM-ISA) предназначен для выявления антител IgM и сочетает фиксацию IgM к твердой поверхности и обработанным формалином паразитам или частичкам латекса, покрытым антигеном. Он является специфичным, чувствительным, не требует использования энзимных конъюгатов и прост в исполнении.

Антитела, определяемые в РНГА, могут персистировать годами и отличаются от антител, выявляемых в НРФА и тесте с красителем. Применение РНГА целесообразно в тот период времени, когда титры в НРФА или в тесте с красителем стабилизировались, поскольку титры РНГА повышаются позднее. Однако повышение титров может произойти настолько поздно, что не будет иметь диагностического значения в случае острой инвазии. Ввиду большой частоты случаев ложноотрицательных результатов РНГА не может быть использована у детей с подозрением на врожденную инвазию или при скрининге для определения возможности заражения во время беременности, так как реакция может быть отрицательной в течение длительного периода в начале инфекции.

Титры в реакции связывания комплемента (РСК) также могут появляться несколькими неделями позднее, чем это установлено в НРФА и тесте с красителем, и также могут персистировать в течение ряда лет. Отрицательный результат в РСК не исключает острой или хронической инфекции, положительный же титр только в одной РСК не доказывает наличия острой инфекции. Существенное повышение титра в РСК, порядка двух серийных разведении при одновременной постановке реакции с парными сыворотками свидетельствуют о недавно приобретенной инфекции.

Острый приобретенный токсоплазмоз у иммунокомпетентных лиц. При подозрении на наличие острой приобретенной инфекц ии у и ммунокомпетентного человека отрицательные результаты теста с красителем или НРФА фактически исключают этот диагноз. Подтвердить диагноз недавно приобретенной острой инфекции может лишь двукратное повышение титров при одновременном исследовании парных сывороток, полученных с интервалом в 3 нед или наличие сероконверсии от отрицательных к положительным титрам (при отсутствии передачи антител при трансфузии). Отдельный высокий титр в любой реакции не доказывает наличия активной инфекции.

Указания по интерпретации результатов реакций представлены ниже. Однако из этих правил возможны исключения.

Титры теста с красителем или НРФА >1: 1000, высокий титр IgM-НРФА (>1:80) или высокие титры DS-IgM-ELISA или IgM-ISA (>6, как ориентир) подтверждают вероятность недавнего острого заражения как при наличии, так и при отсутствии симптомов. У лиц с положительным титром в тесте с красителем или в НРФА отсутствие антител в IgM-НРФА или DS-IgM-ELISA или IgM-ISA почти исключает недавнюю инфекцию.

Токсоплазмоз глаза. Диагностика токсоплазмоза глаза у. д етей старшего возраста и взрослых затруднена тем, что уровень титров антител в сыворотке крови не всегда коррелирует с наличием активных поражений в глазном дне. У больных с активным токсоплазмозным хориоретинитом выявляют невысокие титры в серологических реакциях (1:4—1:64). Если результаты серологической реакции, выполненной на неразведенной сыворотке, отрицательные, токсоплазмозный хориоретинит исключают. Если поражения сетчатки являются характерными и серологические реакции положительны (см. также выше раздел Серологические тесты), диагноз может быть установлен с высокой степенью точности. Если поражения сетчатки атипичны и серологические тесты положительны, диагноз токсоплазмоза является только предположительным; высокая распространенность антител против токсоплазм у нормальных людей исключает предположение о причинной связи.

Активная инфекция у больных с ослабленным иммунитетом. В связи с тем что формирование антител у больных с ослабленным иммунитетом неполноценно, имеющиеся в настоящее время серологические методы, включая IgM-НРФА, DS-IgM-ELISA и IgM-ISA, являются недостаточными для выявления активной инфекции. Например, у больных со СПИДом титры антител в тесте с красителем во многих случаях ниже 1: 1000, антитела IgM обнаруживаются редко. У этих больных появляются антитела IgG, выявляемые с помощью таких методов, как НРФА и реакция агглютинации. Серологические тесты для скрининга на токсоплазмоз целесообразно использовать у больных с ослабленным иммунитетом и бессимптомной инфекцией с целью выявления лиц, находящихся под риском первичного заражения или обострения латентной инфекции (см. также ниже раздел Профилактика). Выявление антигенов токсоплазм в сыворотке крови и, возможно, в спинномозговой жидкости с помощью ELISA является перспективным дополнительным методом для диагностики диссеминированной токсоплазмозной инфекции у больных с ослабленным иммунитетом.

Токсоплазмоз и токсоплазмозная инфекция у беременных женщин. У каждой женщины, готовящейся зачать ребенка, необходимо определить серологический статус с целью выявления зараженных и обеспечения их необходимой информацией о результатах исследований в течение беременности (см. выше Трансплацентарная передача).

При отсутствии обычной программы скрининга, в рамках которой реакции на токсоплазмоз неоднократно выполняются в течение беременности, следует проводить тесты IgM-НРФА, DS-IgM-ELISA или IgM-ISA, если другие серологические тесты были положительными в любой период беременности. Если нет возможности поставить тест IgM-НРФА, DS-IgM-ELISA или IgM-ISA, повторное серологическое тестирование следует проводить через 3 нед для определения стабильности титра или тенденции к повышению. Если тесты IgM-НРФА, DS-IgM-ELISA или IgM-ISA отрицательны, а НРФА или тест с красителем стабильны и менее 1: 1000 (<300 ME), необходимости в дальнейшей оценке нет. Если тест с красителем или НРФА больше или равны 1:1000 (>300 ME) и стабильны (не считая титров в тесте IgM-НРФА), инфазию следует рассматривать как приобретенную по меньшей мере в течение последних 4 нед и, вероятно, более чем за 8 нед до того, как были взяты пробы сыворотки. С практической точки зрения степень риска для плода весьма невысока, если титр теста с красителем или НРФА больше или равен 1 :1000 и стабилен в первые 2 мес беременности.

В то время как титры в тесте с красителем или НРФА достигают пика и стабилизируются к 8-й неделе после заражения, титры в РСК или РНГА продолжают возрастать на протяжении 4—6 мес и более. В связи с этим повышение титров в последних двух тестах может быть не столь информативным при установлении времени возникновения инфекции по отношению к срокам беременности и его не следует использовать в качестве единственного критерия для этих целей.

Проблема часто возникает, когда у женщины без клинических признаков инфекции при исследовании на антитела против токсоплазм в конце I или во II триместре беременности обнаруживают титры в НРФА или тесте с красителем в пределах 1:2000, при этом титры в IgM-НРФА, DS-IgM-ELISA или IgM-ISA отрицательны. В этой ситуации невозможно установить, произошло ли заражение до или после зачатия. Выявление антигена токсоплазм в амниотической жидкости может быть полезным дополнительным методом при решении вопроса о том, произошло ли инфицирование плода у женщины, заразившейся токсоплазмозом в период текущей беременности. Однако в настоящее время этот метод является экспериментальным.

Читать далее: Лечение и профилактика токсоплазмоза