Культуральное исследование
Несмотря на сложность выполнения и необходимость определенного периода времени для получения результата, выделение этиологического агента с помощью культивирования на искусственных питательных средах, в культурах ткани или в экспериментах на животных является обычно наиболее достоверным методом.
Однако диагностическая ценность исследуемого методом посева материала в большой степени зависит от того, не был ли он загрязнен при сборе сопутствующей микробной флорой и был ли доставлен в лабораторию с соблюдением условий, гарантирующих выживание привередливых микроорганизмов.
Сбор материала. В тех случаях, когда получение материала для исследования осуществляется из закрытых глубоких очагов, участок кожных покровов, в котором производится чрескожная аспирация материала иглой, необходимо обрабатывать вначале 70% изопропиловым или этиловым спиртом, а затем продезинфицировать 2% настойкой йода или йодофором. Йодной настойкой обрабатывается кожа в месте предполагаемого прокола, причем вначале она наносится в точку, из которой будет производиться аспирация, а затем концентрическими движениями — вокруг этой точки. Дезинфицирующий агент должен действовать в течение 1—2 мин до аспирации. Все манипуляции следует проводить руками в стерильных перчатках или продезинфицированными руками. Если первая попытка получения материала оказывается неудачной, повторные попытки следует производить, используя новые иглы, и вводить их через вновь продезинфицированный участок. По завершении процедуры йод следует удалить с помощью спирта во избежание аллергической реакции. Если материал для посева забирается из постоянно функционирующей канюли, место забора материала должно дезинфицироваться аналогичным образом.
Когда материал необходимо получить из матки, дренируемой раны или синуса, выходное отверстие должно быть тщательно очищено и продезинфицировано, как описано выше, затем стерильный внутривенный катетер или трубку с множественными отверстиями следует ввести как можно глубже и стерильным шприцем отсосать через нее материал, подлежащий исследованию. Из открытых очагов материал для посева может быть получен с помощью биопсии, аспирации с края очага или путем забора тампоном с поверхности его. В двух первых случаях рана должна быть обработана так же, как при заборе материала из глубоких закрытых очагов. Для забора материала тампоном поверхность открытого раневого очага обрабатывается только стерильным физиологическим раствором для удаления раневого детрита и сапрофитной флоры.
Транспортировка. Все материалы, подлежащие микробиологическому исследованию методом посева, должны быть доставлены в лабораторию как можно быстрее, желательно в течение 1 ч. Отсрочка доставки свыше указанного времени может привести к гибели привередливых микроорганизмов, ускоренному размножению сопутствующей загрязняющей флоры и/или изменению количества присутствующих в материале бактерий, если не будут приняты специальные меры, направленные на преодоление этих нежелательных процессов. Особенно важна быстрая транспортировка при исследовании крови, тканевых жидкостей и экссудатов, в которых могут находиться патогенные микроорганизмы рода
Neisseria или анаэробы. Контейнер для материала должен быть чистым, стерильным (за исключением посуды для фекалий) и соответствующим образом маркированным. Секреты органов дыхания, моча, большие куски тканей и большие объемы жидкостей могут безопасно транспортироваться в пластиковых контейнерах с герметическими крышками. Аспираты удобно и безопасно транспортировать в том же самом шприце, с помощью которого осуществлялся их забор, при условии, что весь воздух удален из шприца, и игла защищена стерильным колпачком. Анаэробные микроорганизмы следует транспортировать в сосуде, из которого удален воздух. При этом важно убедиться, что находящийся в них индикатор остается бесцветным. Розовый или голубой цвет указывает на присутствие кислорода и позволяет предположить, что сосуд больше не пригоден для транспортировки материала, подлежащего исследованию на присутствие анаэробной микрофлоры. Небольшие кусочки тканей (размером менее 1 см 2 ) лучше всего транспортировать в стерильной пробирке с резиновой пробкой, из которой удален газ. После того как проверено состояние индикатора, пробирку устанавливают в вертикальное положение, чтобы свести до минимума потерю тяжелого инертного газа, снимают пробку, помещают материал и пробирку вновь закрывают.
Мазки, подлежащие культуральному исследованию на р-гемолитические стрептококки группы А , могут транспортироваться в сухой стерильной пробирке. Все другие мазки следует помещать в любую из имеющихся в распоряжении коммерческих транспортных сред. Эти среды предотвращают как высыхание микр о- организмов, находящихся на тампоне, так и ускоренное размножение неприхотливых микроорганизмов за счет подавления более привередливых. Хотя для транспортировки материалов, подлежащих исследованию на присутствие анаэробной микрофлоры, имеются специальные транспортные контейнеры, использование мазков для выделения таких микроорганизмов нежелательно.
Культуральное исследование материала. Материал из верхних отделов дыхательного тракта. В связи с тем, что гортань и носоглотка в норме сильно загрязнены сапрофитными и потенциально патогенными бактериями, культуральное исследование микрофлоры этих органов применяется редко, за исключением тех случаев, когда подразумевается присутствие определенных патогенных бактерий, а именно Streptococcus pyogenes, Bordetella pertussis, Corynebacterium diphtheriae, менингококков или гонококков.
Посевы из гортани. В тех случаях, когда материал из гортани посылается на культуральное исследование в лабораторию без специального указания о возможном подозреваемом возбудителе, лаборатория сообщает только о наличии или отсутствии в материале S. pyogenes. В связи с тем, что у 90% больных стрептококковым фарингитом возбудитель выявляетс я- при исследовании однократно взятого мазка слизи из гортани, отрицательный результат такого исследования является весьма обнадеживающим с точки зрения исключения возможности такого заболевания. Подобным же образом обильный или преобладающий рост b-гемолитического стрептококка группы А из материала от больных с признаками и симптомами стрептококкового фарингита является важным показателем наличия у больного антительного ответа на стрептококковые антигены и предположительно наличия заболевания. Значительно труднее интерпретировать результаты посевов, дающих скудный или умеренно выраженный рост S. pyogenes. У большого числа таких больных иммунологические показатели обычно не повышены, и это позволяет предположить, что бактериальный рост отражает состояние носительства.
Посевы из гортани могут не давать положительных результатов у взрослых лиц, жалующихся на боли в горле, если у них не повышена температура тела, нет признаков шейной лимфаденопатии или в недавнем прошлом они не контактировали с другим больным стрептококковым фарингитом, так как положительные результаты посева отмечают менее чем у 5% таких больных. В то же время, если температура тела повышается до 38°С н выше, шейные лимфатические узлы болезненны и горло отечно, результаты посева настолько часто бывают положительными, что во избежание потери времени на их ожидание более рационально немедленно начинать антибактериальную терапию.
Посевы из ротовой полости. В посевах из ротовой полости обычно выявляется массивный рост смешанной флоры, состоящей из аэробных и анаэробных бактерий. Их выделение не имеет никакого клинического значения, за исключением тех случаев, когда предпринимаются специальные меры для предотвращения загрязнения вегетирующей микрофлоры. Это особенно важно для выделения Actinomyces israelii. Этот микроорганизм — представитель нормальной орофарингеальной флоры, и усилия, предпринимаемые для его выделения, не оправдываются до тех пор, пока не удастся получить незагрязненный материал.
Читать далее: Материал из нижних отделов дыхательного пути